免费国产一级特黄aa大片在线-免费国产在线观看-免费国产在线观看不卡-免费国产在线视频-国产一级强片在线观看-国产一级生活片

技術(shù)文章您現(xiàn)在的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 免疫磁珠方法分選細(xì)胞步驟

免疫磁珠方法分選細(xì)胞步驟

更新時間:2012-08-20   點擊次數(shù):16043次
用免疫磁珠做細(xì)胞分選(MACS)是簡捷的免疫細(xì)胞及其它細(xì)胞的分離純化方法。 原理是已包被一抗的磁珠與細(xì)胞表面相應(yīng)分子特異性結(jié)合,或者已包被二抗(羊抗小鼠或羊抗大鼠)的磁珠與預(yù)先已與細(xì)胞表面分子特異結(jié)合的一抗結(jié)合。磁珠攜帶與之結(jié)合的細(xì)胞吸附于分離柱/試管上,實現(xiàn)…
 

用免疫磁珠做細(xì)胞分選(MACS)是簡捷的免疫細(xì)胞及其它細(xì)胞的分離純化方法。
原理是已包被一抗的磁珠與細(xì)胞表面相應(yīng)分子特異性結(jié)合,或者已包被二抗(羊抗小鼠或羊抗大鼠)的磁珠與預(yù)先已與細(xì)胞表面分子特異結(jié)合的一抗結(jié)合。磁珠攜帶與之結(jié)合的細(xì)胞吸附于分離柱/試管上,實現(xiàn)陽性細(xì)胞分離或陰性細(xì)胞的分離。本節(jié)介紹超微磁珠間接標(biāo)記、用分離柱陽性分選細(xì)胞的方法。

Protocal:

1.離心收集待分離細(xì)胞,用少量PBE孵育液(0.5%BSA、0.08%EDTA PH7.2 PBS,真空抽濾除菌及液體內(nèi)氣體)充分混懸細(xì)胞(0.5ml/1×108細(xì)胞),加入一抗(10~20μg/ml終濃度),4° C孵育30分鐘。
2.用20倍體積PBE洗細(xì)胞一次,再加PBE(0.3ml/1×108細(xì)胞)充分混懸細(xì)胞后,加入相應(yīng)二抗包被的超微磁珠,混勻后置8~15° C孵育10~15分鐘。
3.將分離柱安裝入磁場中,加入0.5ml PBE,在重力作用下自然流盡,以預(yù)處理分離柱。

1.如果分離細(xì)胞用作培養(yǎng),全過程在超凈臺中完成。
2.超微磁珠及微小磁場系統(tǒng)適合于少量細(xì)胞分離(如106-107),通常已適用于大多數(shù)實驗研究;此外各公司尚有大磁珠及大磁場供應(yīng),可用于更大量細(xì)胞的分選;除分離柱外,也有試管及其它設(shè)備用于分選;根據(jù)我們應(yīng)用的經(jīng)驗,分離柱由于提供了較大的接觸面,在細(xì)胞分選上具有較多優(yōu)點。磁場也可以自制,用一般的磁鐵即可做成簡易磁場,可提供足夠的磁力。
3.磁珠分離系統(tǒng)分離的細(xì)胞純度可以達(dá)到80~99%,得率在60~90%左右,僅次或相當(dāng)于流式細(xì)胞儀(FACS)的分選效率,與FACS 相比,MACS設(shè)備簡單,耗時極短,故而應(yīng)用廣泛。MACS也可用做FACS分選前的預(yù)分離,以減少FACS所用時間。另外連續(xù)兩次過柱分選可進(jìn)一步提高分選細(xì)胞純度,通常可達(dá)95-99%。
4.在分離柱尾接上限速針頭,收集的流下的細(xì)胞即為陰性選擇細(xì)胞,一般純度低于陽性選擇。
5.分離柱一般只能一次應(yīng)用,再用時降低分離效率;
6.分選下的細(xì)胞可用熒光標(biāo)記抗體(一抗或二抗)標(biāo)記后FACS鑒定純度;我們用熒光抗體直接標(biāo)記細(xì)胞后,用二抗包被磁珠分選出細(xì)胞,直接做FACS分析,也可實現(xiàn)分選和純度檢測。
7.陽性選擇后,如需用第二種表面標(biāo)志繼續(xù)分離,可以用剪切酶剪切下之結(jié)合的磁珠和一抗,再次進(jìn)行下一輪分選。如需進(jìn)行細(xì)胞功能分析,也可經(jīng)培養(yǎng)12~24小時,使結(jié)合的磁珠脫落后進(jìn)一步使用陽選的細(xì)胞做研究。

分選的效率在很大程度上取決于實驗者對關(guān)鍵環(huán)節(jié)的把握。我們建議實驗者在操作前認(rèn)真閱讀相應(yīng)的說明書及以下特別值得提出引起重視的有以下幾點:
1.待分選細(xì)胞中如有貼壁細(xì)胞,建議在分選前先貼壁培養(yǎng)去除,或者提高EDTA濃度;
2.抗體包被磁珠對死細(xì)胞常有非特異性結(jié)合。因而分選前去除死細(xì)胞;
3.新鮮分離骨髓細(xì)胞,先用膠原酶、DNA酶、胰酶聯(lián)合消化,可使細(xì)胞團(tuán)塊解聚,從而提高分離效率。
4.上分離柱前,充分振蕩,混懸細(xì)胞,打散細(xì)胞團(tuán)塊;
5.用分離柱分選,應(yīng)用真空抽濾水,減少水中氣泡,使分離柱不被氣泡阻滯;
6.細(xì)胞懸液加入分離柱中時,應(yīng)將滴管伸至底壁后加入,避免將細(xì)懸液沿管壁流入,使管壁殘流末分選細(xì)胞,以致后繼洗柱過程中,因疏忽末被洗下,zui后導(dǎo)致純度不高。洗柱時,應(yīng)在前次液體充分流盡后,再加洗液。
7.分選細(xì)胞量應(yīng)根據(jù)說明書控制,不超量;
8.孵育時間和溫度應(yīng)按說明書進(jìn)行,延長孵育時間、提高溫度會增加非特異結(jié)合;
9.先用抗體阻斷Fc受體,可降低非特異性結(jié)合;

聯(lián)


永久免费啪啪的网站入口| 欧洲亚洲1卡二卡三卡2021| 四虎无码永久在线影库网址一个人 | 国精产品一二三产区| 精品人妻一区二区三区蜜桃| 日韩一区国产二区欧美三区| 英语老师乖乖挽起裙子怎么写作文| 精品无码国产污污污免费网站国产| 偷拍亚洲另类无码专区制服| PYTHON人马大战CSDN| 久久精品人人做人人爽97| 无码人妻丰满熟妇区五十路百度| АⅤ天堂 中文在线| 老妇FREE性VIDEOSXX| 亚洲VA韩国VA欧美VA| 国产草草影院CCYYCOM| 欧洲精品码一区二区三区免费看| AV天堂精品久久久久2| 久久久久人妻精品一区蜜桃| 亚洲AV永久无码国产精品久久| 国产成人69视频午夜福利在线观| 太多了太满了肚子装不下了| 国产成人精品福利一区二区三区 | 老旺的大肉蟒进进出出视频| 亚洲国产精品久久久天堂不卡海量| 国产粗话肉麻对白在线播放| 日产乱码一二三区别免费一 | 色婷婷亚洲精品综合影院| JAPANESE熟女熟妇| 男人进入女人里面想动还是不想动| 亚洲午夜无码极品久久| 好男人观看免费视频2019| 无码人妻精品中文字幕| 国产新婚夫妇叫床声不断| 无码AⅤ精品一区二区三区| 成长人短视频B站| 欧美最猛性XXXXX(亚洲精品)| √天堂资源中文WWW| 久久亚洲国产精品成人AV秋霞| 亚洲乱码日产精品BD在线| 国产在线国偷精品免费看| 午夜无码视频在线观看网站| 国产精品久久高潮呻吟无码| 天天做天天爱天天爽综合网| 公和熄小婷乱中文字幕| 日韩人妻无码专区精品| 差差差无掩盖视频30分钟| 人妻少妇精品视频无码专区| WWW夜片内射视频在观看视频| 欧美无MATE30PRO巨| A级毛片毛片免费观看久潮喷| 老司机午夜精品视频资源| 99久久国产福利自产拍| 欧美激情000ⅩXX同性| 18黑白丝水手服自慰喷水网站| 情人伊人久久综合亚洲| ZOMBIE视频SUPREME| 四虎必出精品884| 父债子偿BY画崖海棠| 午夜成人无码福利免费视频| 国产怡春院无码一区二区 | 欧美性受XXXX喷潮| 公粗挺进了我的密道在线观看| 性一交一乱一色一视频| 国精产品一线二线三线 | 成熟丰满熟妇高潮XXXX| 小说 亚洲 无码 精品| 国产又爽又黄又刺激的视频| 亚洲一区日韩高清中文字幕亚洲| 女性自慰AⅤ片高清免费| JIZZJIZZ中国18大学生| 婷婷综合久久狠狠色成人网| 精品国产一区二区亚洲人成毛片| 亚洲区小说区图片区QVOD | 被带到满是X玩具的房间挑调游戏| 日本熟妇厨房XXXXX乱电影| 初尝黑人巨砲波多野结衣| 亚洲 欧美 中文 日韩AⅤ| 老熟女与小伙偷欢视频| 成人AV在线网站| 天堂AV无码一区二区三区| 精品日产1区2卡三卡麻豆| CHINESETUBE国产在线| 无码欧美毛片一区二区三在线视频| 久久精品女同亚洲女同| 扒开两腿中间缝流白浆在线看| 日韩一区二区三区视频| 激情内射人妻1区2区3区| 亚洲中文字幕无码AV永久| 蜜臀亚洲AV无码精品国产午夜| FREEⅩXX性欧美HD丝袜| 无码中文字幕加勒比一本二本| 娇小美女被黑壮汉C到喷水| 野花影视在线观看免费高清完整版| 免费一看一级毛片少妇丰满2| WWW国产精品内射熟女| 性无码专区一色吊丝中文字幕| 蜜臀人妻四季AV一区二区不卡| 国产成人午夜性A一级毛片老女人| 亚洲AV无码片一区二区三区| 久久婷婷五月综合色99啪| DY888午夜福利视频| 驯服人妻HD中字日本| 女人下边水润紧致好处| 国产精品宅男擼66M3U8| 亚洲人妻免费视频| 男女裸交免费无遮挡全过程| 嘼皇PORONOⅤIDEOS极| 亚洲人成网77777色在线播放| 日本熟妇色XXXXX日本老妇| 精品视频一区二区三区在线观看| 被强迫的爱人 电影| 无码一区二区三区在线观看| 免费AV片在线观看无需播放器 | 激情五月丁香六月综合AVXXXX| WWW久久无码天堂MV| 亚洲精品成人无码中文毛片不卡 | 无码成人黄动漫在线观看| 久久精品亚洲精品无码金尊| 大学生被内谢粉嫩无套| 亚洲国产精彩中文乱码AV| 日本老熟妇ⅩXX| 狠狠色噜噜狠狠狠8888米奇| 18禁无遮挡羞羞啪啪免费网站| 西西人体午夜视频无码| 破了亲妺妺的处免费视频国产| 精品国产一区二区三区无码蜜桃| 成人羞羞视频免费网站| 亚洲高清毛片一区二区| 日产精品一卡2卡三卡4乱码 | J日本成熟IPHONE69| 亚洲欧洲精品成人久久曰| 色婷婷亚洲一区二区综合| 麻花传媒剧在线MV免费观看| 公翁大龟挺进秀婷全文免费阅读| 亚洲欧洲日产国码无码| 他扒开内裤把舌头进去会有影响吗 | 在床上拔萝卜视频高清免费看| 日韩无码视频一区二区| 看黄A大片爽爽影院免费无码| 国产女人的高潮国语对白| 中国女人内射6XXXXX| 试看A级看一毛片二十分钟| 久久国产精品-国产精品| 波多野结衣系列18部无码观看A| 一本一本久久AA综合精品| 无码中文精品视视在线观看| 人人超碰97CAOPOREN国| 精品卡一卡二卡3卡高清乱码| 夫妇当面交换作爱2| 99久久人妻无码精品系列蜜桃| 亚洲情文字幕在线一区| 午夜福利理论片高清在线观看| 日本一区二区三区久久久久久久久| 蜜桃AV不卡无码三区| 九月在线 视频 在线观看| 堕落的人妻1―10雨柔| 一本大道香蕉在线精品| 亚洲AV无码成人精品区日韩| 色综合久久综合中文综合网 | 俄罗斯人与ZOOM人的区别| 91人妻人人揉人人躁人人| 亚洲AV日韩AⅤ无码色老头| 情侣过夜的男生会忍住吗| 麻花豆传媒MV在线播放| 警察被两个混混脱裤玩J视频| 国产欧美日韩第一章午夜在线| 粉嫩人妻一区二区三区| 中文字幕AV无码免费久久| 亚洲AV成人中文无码专区| 熟女俱乐部五十路六十路AV| 人人妻人人澡人人爽精品欧美| 你下水好多下水道BD| 浪货趴办公桌~H揉秘书电影| 精品久久久无码中文字幕一丶| 国产午夜福利久久精品| 国产成人无码免费视频79| 大陆老太XXXXXHD| 啊灬啊灬啊灬快灬深用力| 92午夜少妇极品福利无码电影 | 国产成人精品无码青草| 赤裸羔羊Ⅲ致命快感| 别揉我奶头~嗯~啊~动态图视频| 99热门精品一区二区三区无码| 中文天堂网在线最新版| 野花社区在线观看免费直播WWW| 无码一区二区三区在线| 偷欢人妻激情系列| 熟妇人妻精品一区二区视频免费的 | 特黄 做受又硬又粗又大视频| 日韩v亚洲v欧美v精品综合| 人人爽亚洲AⅤ人人爽AV人人片| 老师在办公室被躁在线观看| 久久精品日日躁夜夜躁欧美| 精品无码黑人又粗又大又长AV | 成年免费A级毛片| 暗交小拗女一区二| 斑马视频电影免费观看| 白嫩少妇激情无码| 白丝?扒腿自慰爽出白浆|